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兔精液液态保存的研究进展

时间:2019-08-02 21:16来源:未知 作者:admin 点击:
随着养兔业的不断发展,选择优良的种公兔的精液,提高兔群的品质和繁殖率,对兔业的发展有重大的意义。现在各种家畜人工授精技术日益发展与提高,人们越来越认识到家兔生产中

  随着养兔业的不断发展,选择优良的种公兔的精液,提高兔群的品质和繁殖率,对兔业的发展有重大的意义。现在各种家畜人工授精技术日益发展与提高,人们越来越认识到家兔生产中人工授精技术的重要性,它比传统的本交方法管理更严格,更有计划性,可以集中分娩和管理。人工授精已经应用到肉兔生产中 20多年了 ,但是不能被广泛的应用,其中一个重要的因素是精液的保存问题。由于冷冻精液不能被普遍的应用到家兔生产中 ,而液态保存可以解决精液的运输问题,为人工授精普遍推广提供了条件。

  液态保存是将精液保存在一定的变动幅度的温度下,利用一定范围的酸性环境抑制精子的活动,减少其能量的消耗,使精子保持在可逆性的静止状态而不丧失受精能力。因此,所有稀释液和保存环境的主要作用,都是为了:

  采集的精液在进行品质检查后,其活力高于70% 才有保存的意义,然后进行精液的稀释。稀释的目的在于提高精液的利用率,增加良种公兔的种用价值。

  至于稀释的倍数要根据公兔精液的品质而定,但是必须在保证有效精子数的前提下来确定稀释倍数。较低程度的稀释促进精子运动,可能是冲淡了精清中一些抑制代谢的物质。而过度稀释导致精子丧失运动能力、代谢活性和受精能力,即稀释效应。精清中有维持精子运动和存活所必需的离子等,还有维持精子膜稳定和受精能力的蛋白质、抗氧化物质以及其他有益成分,过度稀释使这些成分浓度过低,无法保护精子。过度稀释带来大量电解质,造成子表面电荷过多,产生头对头凝集等有害反应。兔精清中可能存在去获能因子,在体外保存中可抑制精子获能,而稀释会使其浓度下降,使精子过早获能,从而加速死亡 。精清中也存在一些损害精子功能的物质,降低浓度或除去更利于精子保存,如精清中的芳基磺胺酶能从对质膜有稳定作用的硫酸盐复合糖上脱去硫酸盐,并促进精子获能。精液的稀释还应考虑人工授精所需的精子总量和稀释精液的总体积。一般每只兔每次输入 0.2---0.5mL,输入精液的有效精子数在2*10(次方)---4*10(次方) 个之间,即可达到正常受精的要求。1993年 Farrel; 报道了人工授精需要的最少精子数受很多因素的影响,其中有稀释液的种类和精液储存的时间,而 1997 年 Vindesl提出人工授精的最少精子数是 4*10(次方)个有适当的妊娠率 。2000年 Roca试验结果显示精液使用的总精子数是 1.5*10(次方)。这些可能是由于试验的条件不同造成的结果。

  兔精液液态保存时的稀释液应该能减弱精子运动、抑制代谢、延长体外存活时间、扩大精液体积并提高精液利用率。一般稀释液有营养剂和保护剂两部分组成。营养剂是构成兔精液稀释液的主要成分,这些成分主要包括营养性的糖类,如葡萄糖、蔗糖、等,为精子在体外生存提供养分,供给精子营养,补充精子能量的消耗,同时,糖类与细胞膜磷脂结合,置换磷脂头部周围的水,防止膜的损伤。还包括卵黄、奶类等,这些还具有调节渗透压、降低精液中电解质浓度、保护精子膜的作用。保护剂主要是由缓冲物质和其他添加物组成。常用的缓冲物质是三羟基氨基甲烷 、柠檬酸、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠等,这些缓冲物质对于中和精子代谢酸性物质和酶反应具有良好的缓冲作用。在兔精液采集和操作过程中,不可避免地带入细菌等污染物,在体外保存时间越长,微生物会过度繁殖造成精子大量死亡。抗生素如青霉素、链霉素等,主要是抑制病原微生物对精子的危害。而现在在兔精液稀释液中加入抗生素是抑制精液内细菌繁衍的一种常规的方法。

  目前常用的稀释液有 5%或 7% 的葡萄糖、11%’的蔗糖液及生理盐水等。袁慕陶和尹召华用卵黄 *柠檬酸钠 * 葡萄糖稀释液进行稀释。此外,还有蔗糖 - 乳糖 -卵黄-葡萄糖- 柠檬酸等稀释液,还有人用 BFS。保存中加入一定量的抗生素。

  精液保存过程中由于精子代谢很强烈,能量消耗快,同时代谢产物的积累,改变了 ph值,导致某些酶活性被抑制,致使精子丧失受精能力,因此保存液的 PH值保持一定的范围非常重要。一般正常精液的 PH 值为 6.59——7.5之间,当精子浓度大时,PH值会偏低,而保存时要与正常精液的 PH 值相等或偏低+)。2000年 Roea 在试验中用的都是 PH值 6.9的稀释液保存液。《兔学堂》

  精子的自身结构及其生理生化特性是影响精液保存效果的重要因素。根据精液的生理生化特性,创造适应于精子存活的体外生存环境,是精液保存的基本条件。在影响精子存活的外界环境因素中,保存温度非常重要。兔精子在比较低的温度下保存稀释的精液可以减少精子的能量消耗和有害代谢物生成,从而延长精子体外存活时间,并维持其功能。兔精液在采出后,如果快速从体温 38.5——39.5°c 下降到 0°c 以下会大量死亡,此过程中,精子细胞膜中不同脂类在不同温度发生由液相到胶相的相变、分离,使膜流动性下降,蛋白质运动和组装受阻,选择通透性丧失,胞内离子和酶外流,膜上酶活性下降,膜通道调节失控。

  最初在 -2——2°c保存兔精液保存 3.5天的精液输精,其受胎率和产仔数与用鲜精输精之间没有明显的差异 ,而兔精液在5°c下保存兔精液保存在15°比5°c有好的效果 , ,到 2005年 LoPez也是用 15°c 保存精液。

  渗透压对精子的影响与 PH 值有相等的重要性,两者之间的相互关系尤为密切,渗透压过高过低都不利于精液的储存。通常等渗或稍高渗的介质比高渗的更利于保护精子功能,。稀释液的渗透压主要是由非离子物质维持,如葡萄糖等。稀释液中离子强度可能对精子保存不起关键作用,但离子强度过高会造成精子表面蛋白溶解脱落等损伤 。现在国内外对兔精液的渗透压研究的很少。一般用的是330——350mosmg的稀释液 。

  正确评价保存精液的质量、选择高质量的精液是 确 保 人 工 授 精 成 功 的 关 键 。 精 液 常 规 检 查,检查的项目包括精液的容量、PH值、运动性、浓度、总量和精子形态等。尽管这些常规指标能够在一定程度上反映精液的品质,但是除了精子运动性以外,其他指标与受精能力不存在相关性,。常用的精子功能检测指标有运动能力、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性、与卵结合能力,和获能率等。检测方法主要是利用光学显微镜、荧光显微镜、流式细胞计数仪、运动分析系统 , 和计算机辅助精子分析系统等,通过常规染料和荧光燃料、低渗膨胀实验和精卵结合实验等,分析精子的形态和功能。迄今为止,还没有单独一种体外分析方法能准确评价精子的功能。因此,必须结合使用几种方法,检测多个指标,才能较准确的评价精子的功能。

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